方案優勢

該方法簡單快速，其靈敏度、準確度和精密度均能滿足強化食品中維生素C 的檢測要求。

采用標準

相關標準

方法/原理/步驟

　　溶液配制

　　流動相：0.05 mol／L磷酸二氫鉀溶液(pH 3)，準確稱取磷酸二氫鉀固體13.619 4 g，用水溶解后過0.45μm濾膜，用水定容至2 L，然后滴加磷酸調節pH值為3。

　　提取液：稱取30 g偏磷酸，用水溶解并稀釋至1 000 mL。

　　維生素C標準儲備液：精確稱取0.010 0 g維生素C標準品，用3%偏磷酸溶液溶解，配制成1mg／mL的標準儲備液。4℃避光保存，現用現配。

　　樣品處理

　　1.果汁飲料

　　稱取試樣2 g于50 mL棕色容量瓶中，用3%偏磷酸溶液定容至刻度，混勻，用0.22μm水系濾膜過濾，待測定。

　　2.大米、果凍、果泥、含乳飲料

　　稱取試樣5 g，加入30 mL 3%偏磷酸溶液，超聲15 min且超聲過程中加入冰塊控制水浴溫度在10～20℃之間，以4 000 r／min離心10 min。用0.22μm水系濾膜過濾后待測。

　　3.奶粉

　　稱取試樣2 g，加入20 mL 45～50℃水，渦旋混勻1 min，超聲15 min且超聲過程中需要加入冰塊控制水浴溫度在10～20℃之間。用5 mol／L鹽酸溶液調節pH至1.90±0.5，放置2 min，再用5mol／L氫氧化鈉溶液調節pH至4.70±0.5，以4 000r／min離心10 min，用0.22μm水系濾膜過濾后待測。上述樣品處理驟均在避光條件下進行。

　　維生素C的穩定性試驗

　　維生素C是最不穩定的水溶性維生素，對光和溫度都非常敏感，堿性和中性環境中穩定性較差，且易被氧化。用不同溶劑(1%草酸、0.01 mol／L鹽酸、3%偏磷酸、0.01%乙酸、水、0.1%三氟乙酸、0.1mol／L KH2PO4、10 mmol／L乙酸銨和甲醇)分別配制100μg／mL標準溶液，4℃冰箱避光儲存。測試不同溶劑不同時間段維生素C的峰面積并進行比較，結果表明，維生素C在酸性環境中抗氧化能力較好，且采用3%偏磷酸溶劑配制的維生素C標準儲備液在10 h內基本不分解，可用于定量分析，10 h后開始出現少量分解，到12 h時分解22%。因此用3%偏磷酸配制的儲備溶液在10 h之內能夠滿足定量分析的要求。

　　維生素C提取條件優化

　　1.提取溶劑

　　大米、果泥、果凍和含乳飲料：維生素C具有較強的還原性，易受空氣、光、熱等因素影響，但在酸性條件下穩定。實驗選取了0.1%鹽酸、0.1%草酸、水、3%偏磷酸、0.01 mol／L鹽酸–甲醇(20∶80)、甲醇–水–磷酸(100∶400∶0.5)、0.1%磷酸、0.01%三氯乙酸–甲醇(50∶50)、4%三氯乙酸、3%偏磷酸–乙酸(50∶50)作為提取劑做添加回收試驗，結果發現，用3%偏磷酸作為提取劑回收率高且沉淀完全，且用3%偏磷酸配制的維生素C儲備溶液在10 h之內能夠穩定存在。因此實驗選取3%偏磷酸作為提取溶劑。

　　奶粉：因奶粉含有蛋白質、脂肪、維生素、多糖等復雜成分使得前處理方法比其它基質有較大難度。尤其奶粉中含有大量的蛋白質及脂肪等大分子兩性物質，在測定過程中容易形成泡沫、渾濁或出現沉淀而無法進行測定。實驗嘗試加入乙腈、乙酸鋅–亞鐵氰化鉀、乙醇、三氯甲烷、三氯乙酸沉淀蛋白，發現回收率偏低且沉淀不完全；利用固相萃取法進行樣品前處理步驟繁瑣，且回收率偏低。實驗發現：利用等電位法沉淀蛋白質，不僅可以使蛋白質沉淀完全且回收率高。考慮到維生素C在酸性環境中相對穩定，因此在前處理過程中既要保證蛋白質沉淀完全，又要使樣品溶液pH值小于7。實驗參考GB5413.14–2012，并根據維生素C的性質進行了相應調整，試驗發現：當pH值為1.9±0.5和4.7±0.5時沉淀效果較好，提取液澄清，且大分子物質沉淀完全，維生素C的平均回收率在90.8%～106.5%之間，相對標準偏差在0.21%～3.72%之間。

儀器設備

　　實驗室所用儀器

??? 高效液相色譜儀：Agilent 1200型，美國Agilent公司；

　　分析天平：PL602–L型，美國Mettler Toledo公司；

　　離心機：Sigma 3–18 k型，德國Sigma公司；

??? 組織搗碎機：PT3100D型，瑞士Kinematica公司；

　　超聲振蕩器：KQ–500E型，昆山市超聲儀器有限公司；

　　水純化系統：Milli-Q型，美國Millipore公司；

　　pH計：Delta 320型，美國Mettler Toledo公司；維生素C(L-抗壞血酸)標準品：純度不小于99%，美國Sigma公司；

?? 組織搗碎機介紹

PT3100D是Kinematica PT3000的升級版，性能超群，使用范圍廣，非常適合實驗室對樣品的嚴格控制處理，目前是實驗室最先進和成功的均質器：
全新馬達設計:
●全新1200W的變頻馬達 運轉平穩，啟動平穩柔和，轉速最高30000rpm
●低噪音設計，噪音水平: 約73 dB(A) / 30000rpm
●新轉速控制技術: 最新轉速控制技術，反饋電路設計，輸出功率會隨樣品粘度變化而變化，保證均質過程在恒定轉速下進行。精確度1%(FS)