方案優(yōu)勢

該方法簡單快速，其靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度均能滿足強化食品中維生素C 的檢測要求。

采用標(biāo)準(zhǔn)

相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)

方法/原理/步驟

　　溶液配制

　　流動相：0.05 mol／L磷酸二氫鉀溶液(pH 3)，準(zhǔn)確稱取磷酸二氫鉀固體13.619 4 g，用水溶解后過0.45μm濾膜，用水定容至2 L，然后滴加磷酸調(diào)節(jié)pH值為3。

　　提取液：稱取30 g偏磷酸，用水溶解并稀釋至1 000 mL。

　　維生素C標(biāo)準(zhǔn)儲備液：精確稱取0.010 0 g維生素C標(biāo)準(zhǔn)品，用3%偏磷酸溶液溶解，配制成1mg／mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。4℃避光保存，現(xiàn)用現(xiàn)配。

　　樣品處理

　　1.果汁飲料

　　稱取試樣2 g于50 mL棕色容量瓶中，用3%偏磷酸溶液定容至刻度，混勻，用0.22μm水系濾膜過濾，待測定。

　　2.大米、果凍、果泥、含乳飲料

　　稱取試樣5 g，加入30 mL 3%偏磷酸溶液，超聲15 min且超聲過程中加入冰塊控制水浴溫度在10～20℃之間，以4 000 r／min離心10 min。用0.22μm水系濾膜過濾后待測。

　　3.奶粉

　　稱取試樣2 g，加入20 mL 45～50℃水，渦旋混勻1 min，超聲15 min且超聲過程中需要加入冰塊控制水浴溫度在10～20℃之間。用5 mol／L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至1.90±0.5，放置2 min，再用5mol／L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至4.70±0.5，以4 000r／min離心10 min，用0.22μm水系濾膜過濾后待測。上述樣品處理驟均在避光條件下進(jìn)行。

　　維生素C的穩(wěn)定性試驗

　　維生素C是最不穩(wěn)定的水溶性維生素，對光和溫度都非常敏感，堿性和中性環(huán)境中穩(wěn)定性較差，且易被氧化。用不同溶劑(1%草酸、0.01 mol／L鹽酸、3%偏磷酸、0.01%乙酸、水、0.1%三氟乙酸、0.1mol／L KH2PO4、10 mmol／L乙酸銨和甲醇)分別配制100μg／mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，4℃冰箱避光儲存。測試不同溶劑不同時間段維生素C的峰面積并進(jìn)行比較，結(jié)果表明，維生素C在酸性環(huán)境中抗氧化能力較好，且采用3%偏磷酸溶劑配制的維生素C標(biāo)準(zhǔn)儲備液在10 h內(nèi)基本不分解，可用于定量分析，10 h后開始出現(xiàn)少量分解，到12 h時分解22%。因此用3%偏磷酸配制的儲備溶液在10 h之內(nèi)能夠滿足定量分析的要求。

　　維生素C提取條件優(yōu)化

　　1.提取溶劑

　　大米、果泥、果凍和含乳飲料：維生素C具有較強的還原性，易受空氣、光、熱等因素影響，但在酸性條件下穩(wěn)定。實驗選取了0.1%鹽酸、0.1%草酸、水、3%偏磷酸、0.01 mol／L鹽酸–甲醇(20∶80)、甲醇–水–磷酸(100∶400∶0.5)、0.1%磷酸、0.01%三氯乙酸–甲醇(50∶50)、4%三氯乙酸、3%偏磷酸–乙酸(50∶50)作為提取劑做添加回收試驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，用3%偏磷酸作為提取劑回收率高且沉淀完全，且用3%偏磷酸配制的維生素C儲備溶液在10 h之內(nèi)能夠穩(wěn)定存在。因此實驗選取3%偏磷酸作為提取溶劑。

　　奶粉：因奶粉含有蛋白質(zhì)、脂肪、維生素、多糖等復(fù)雜成分使得前處理方法比其它基質(zhì)有較大難度。尤其奶粉中含有大量的蛋白質(zhì)及脂肪等大分子兩性物質(zhì)，在測定過程中容易形成泡沫、渾濁或出現(xiàn)沉淀而無法進(jìn)行測定。實驗嘗試加入乙腈、乙酸鋅–亞鐵氰化鉀、乙醇、三氯甲烷、三氯乙酸沉淀蛋白，發(fā)現(xiàn)回收率偏低且沉淀不完全；利用固相萃取法進(jìn)行樣品前處理步驟繁瑣，且回收率偏低。實驗發(fā)現(xiàn)：利用等電位法沉淀蛋白質(zhì)，不僅可以使蛋白質(zhì)沉淀完全且回收率高。考慮到維生素C在酸性環(huán)境中相對穩(wěn)定，因此在前處理過程中既要保證蛋白質(zhì)沉淀完全，又要使樣品溶液pH值小于7。實驗參考GB5413.14–2012，并根據(jù)維生素C的性質(zhì)進(jìn)行了相應(yīng)調(diào)整，試驗發(fā)現(xiàn)：當(dāng)pH值為1.9±0.5和4.7±0.5時沉淀效果較好，提取液澄清，且大分子物質(zhì)沉淀完全，維生素C的平均回收率在90.8%～106.5%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.21%～3.72%之間。

儀器設(shè)備

　　實驗室所用儀器

??? 高效液相色譜儀：Agilent 1200型，美國Agilent公司；

　　分析天平：PL602–L型，美國Mettler Toledo公司；

　　離心機：Sigma 3–18 k型，德國Sigma公司；

??? 組織搗碎機：PT3100D型，瑞士Kinematica公司；

　　超聲振蕩器：KQ–500E型，昆山市超聲儀器有限公司；

　　水純化系統(tǒng)：Milli-Q型，美國Millipore公司；

　　pH計：Delta 320型，美國Mettler Toledo公司；維生素C(L-抗壞血酸)標(biāo)準(zhǔn)品：純度不小于99%，美國Sigma公司；

?? 組織搗碎機介紹

PT3100D是Kinematica PT3000的升級版，性能超群，使用范圍廣，非常適合實驗室對樣品的嚴(yán)格控制處理，目前是實驗室最先進(jìn)和成功的均質(zhì)器：
全新馬達(dá)設(shè)計:
●全新1200W的變頻馬達(dá) 運轉(zhuǎn)平穩(wěn)，啟動平穩(wěn)柔和，轉(zhuǎn)速最高30000rpm
●低噪音設(shè)計，噪音水平: 約73 dB(A) / 30000rpm
●新轉(zhuǎn)速控制技術(shù): 最新轉(zhuǎn)速控制技術(shù)，反饋電路設(shè)計，輸出功率會隨樣品粘度變化而變化，保證均質(zhì)過程在恒定轉(zhuǎn)速下進(jìn)行。精確度1%(FS)