方案優勢

高效液相色譜法(HPLC)是利用不同物質在流動相 和固定相中的選擇性分配實現對目標物的分離, 重復 性好、操作方便, 是現如今運用最廣泛的用于多酚類物 質檢測的方法。

采用標準

相關標準

方法/原理/步驟

　　蘋果的鮮切加工

　　紅富士蘋果經自來水清洗后,在滅菌砧板上用滅菌的削皮刀削皮去除果核,切割成約1 cm×1 cm×1cm的小塊備用。

　　鮮切蘋果多酚的提取

　　提取溶劑為80%乙醇,料液比為1:6,均質后置于棕色瓶中,常溫超聲波提取30 min, 4℃12000r/min離心20 min,取上清液采用4.5μm濾膜過濾后進行液相分析。

　　標準工作曲線的建立

　　準確配制5個階梯濃度的10種多酚物質的標準溶液,過0.45μm膜,按上述確定的色譜條件測定,以峰面積Y為縱坐標,質量濃度X為橫坐標,繪制10條多酚標準曲線。

　　色譜穩定性檢驗結果

　　標樣濃度為100 mg/L時,日內連續6次進樣,保留時間的相對標準偏差(RSD)為0.89%,峰面積(Peak area)的RSD為2.23%;日間連續6 d進樣,保留時間的RSD為1.29%,峰面積的RSD為2.51%。說明色譜工作性能穩定,測定結果可靠。

　　多酚回收率測定

　　向蘋果多酚中定量添加已知濃度的不同標準樣品,濃度分別為10μg/mL和50μg/mL。按照2.2.2樣的方法制備測定多酚含量,根據測得樣品中10種多酚含量來計算出相應的回收率。

　　10種多酚標準品液相色譜圖

儀器設備

　　儀器：高效液相色譜儀(LC-2010HT),日本島津公司;超速冷凍離心機(X-30R),美國貝克曼公司;超純水器(Class UF),美國ELGA威立雅公司;旋轉蒸發儀(IKA RV10),德國IKA公司;超聲波清洗機(JRC-400),山東濟寧潤通超聲電子有限公司。

　　儀器色譜條件：

　　采用Hypersil BDS C18色譜柱(4.6 mm×25 cm):檢測波長為280 nm和320 nm時,流動相為甲醇和乙酸,流速: 1 mL/min,進樣量: 20μL。檢測波長為254nm時,流動相為乙腈和磷酸二氫鉀水溶液(pH為3.0),流速: 0.8 mL/min,進樣量: 20μL。

　　洗脫條件(320 nm和280 nm):流動相:流動相A:甲醇,流動相B:水:乙酸(V:V=99:1)。洗脫程序:0～32 min, B為90%; 32～40 min, B為90%～70%;40～50 min, B為70%～10%; 50～51 min, B為10%～90%; 51~65 min, B為90%。