方案優(yōu)勢

HPLC檢測方法使用于止咳平喘類中成藥中摻入的茶堿與二羥丙茶堿化學藥品檢測分析, 具有較強的可操作性。

采用標準

《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準》

方法/原理/步驟

　　色譜條件

　　色譜柱是十八烷基硅烷鍵與硅膠填充柱,即Agela Technologies promosil XBPl8 5μm 4.6 mm×250mm。其流動相比例為流動相A：流動相B= 90:10,茶堿與羥丙茶堿的分離度均在1.5以上。流速為1.0 ml/min,進樣量是10μl,檢測波長達到270 nm,理論板數(shù)不低于1500,柱溫維持在30℃。

　　對照品溶液的制備

　　分別精密的稱取茶堿與二羥丙茶堿對照品5~25ml置于容量瓶內(nèi),再加入甲醇進行溶解稀釋至刻度,搖勻作為對照的儲備液。另外在各自稱取1~10ml至容量瓶中加入甲醇溶解稀釋,作為混合的對照品溶液。

　　供試品溶液的制備

　　如果供試品為片劑或丸劑,通常取用1d的服用量,將50ml的細粉放入容量瓶中,加入適量的甲醇溶解稀釋,同時選用超聲處理15min,并進行振搖使得藥品均勻,放冷至室溫后過濾獲得續(xù)濾液作為供試品溶液。或取口服液體10ml,按照2:8的比例添加氯仿和甲醇,超聲15min后,將液體放冷,加入混合液進行稀釋,搖勻濾過后,將獲得的續(xù)濾液蒸干,所剩的殘渣加入甲醇達到25 ml成為供試品溶液。

　　方法學考察

　　1.線性關系考察

　　將對照品儲備液分別吸取0.25 ml、1 ml、4 ml以及10 ml,制成濃度為5μg/ml、20μg/ml、80μg/ml、以及200μg/ml的各種標準溶液,再以10μl的進樣量注入LC2010C中。根據(jù)峰面積所形成的曲線,得出茶堿與二羥丙茶堿的線性回歸方程為：茶堿：Y=32232X+2031.5,R=0.9998；二羥丙茶堿：Y=19918X+19141, R=0.9996。表明茶堿與二羥丙茶堿線性關系良好時,其進樣量為5~200μg/ml。

　　2.檢出限試驗

　　將兩種對照品儲備液溶解稀釋若干倍以后,以10μl的進樣量注入LC2010C中,重點記錄主峰高度為噪音峰高3倍時的色譜圖。最后檢測出茶堿的檢出限為1ng,二羥丙茶堿4ng。

　　3.精密度試驗

　　選用線性試驗下的混合標準液200μg/ml,注入LC2010C中反復進行5次試驗。根據(jù)色譜圖,并計算出茶堿同二羥丙茶堿的峰面積,最后得出兩種化學藥品的RSD依次為0.198%和0.170%,可以看出兩種化學藥品成分的精密度都相當高。

　　4.重復性試驗

　　按照回收率試驗的樣品,以10μl的進樣量注入LC2010C中,前后共進行5次,詳細記錄好每項的色譜圖。得到的茶堿RSD為0.70%,二羥丙茶堿1.03%。從在這樣的檢測試驗方法下,可知茶堿與二羥丙茶堿所呈現(xiàn)的重復性良好。

　　檢測結果

　　通過上面幾種不同的方法學試驗分析,可以看出該方法適用于茶堿與二羥丙茶堿的高效液相色譜檢測。經(jīng)過精密的HPLC檢測,在37批樣品中不存在添加茶堿與二羥丙茶堿兩種化學藥品的止咳平喘類中成藥。

儀器設備

高效液相色譜儀

高效液相色譜儀的系統(tǒng)由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中做相對運動時，經(jīng)過反復多次的吸附- 解吸的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。