方案優(yōu)勢(shì)

結(jié)果分離效果好，快速準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于本制劑的質(zhì)量控制。

采用標(biāo)準(zhǔn)

國(guó)家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)

方法/原理/步驟

　　試藥

　　黃芩苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)200512)；雙黃連口服液(哈高科白天鵝藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號(hào)05117-1；江蘇吳中實(shí)業(yè)股份有限公司蘇州長(zhǎng)征制藥廠，批號(hào)050114；中國(guó)黑龍江完達(dá)山制藥，批號(hào)050301)；甲醇(色譜純)、冰乙酸(AR)，重蒸水。

　　試驗(yàn)方法和結(jié)果

　　1.對(duì)照品液的制備

　　精密稱取黃芩苷對(duì)照品20.60mg，置200ml量瓶中，加50%甲醇適量，置水浴中振搖使溶解，放置至室溫，稀釋至刻度，搖勻，即得。

　　2.標(biāo)準(zhǔn)曲線

　　精密吸取上述對(duì)照品溶液0.25ml，0.50ml，0.75ml，1.00ml，1.25ml，1.50ml，1.75ml，2.00ml，置10ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度。進(jìn)樣20μl，記錄色譜圖。以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)繪制回歸方程：Y=6535.7X+9508(r=0.9995)，結(jié)果黃芩苷在25～220μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

　　3.精密度試驗(yàn)

　　分別精密進(jìn)對(duì)照品溶液20μl，重復(fù)進(jìn)樣6次，按上述色譜條件記錄峰面積，結(jié)果RSD%=0.89%。

　　4.樣品分離度

　　按樣品測(cè)定法制備供試液進(jìn)樣20μl，記錄色譜圖，結(jié)果峰與相鄰雜質(zhì)峰分離完全，分離度≥2.5。

　　5.重現(xiàn)性試驗(yàn)

　　取同一批樣品(05117-1)，按樣品測(cè)定法制備供試液，在上述色譜條件下進(jìn)行5次平行測(cè)定，結(jié)果RSD=1.56%，表明本法測(cè)定的重現(xiàn)性好。

　　6.穩(wěn)定性試驗(yàn)

　　取批號(hào)05117-1的供試品溶液，分別在制備后0，2，4，8，12h測(cè)定，結(jié)果黃芩苷的峰面積RSD=1.82%，表明溶液基本穩(wěn)定。

　　7.陰性干擾實(shí)驗(yàn)

　　取陰性對(duì)照樣品(按《中國(guó)藥典》2000版一部缺黃芩苷制劑)，精密進(jìn)陰性對(duì)照品溶液20μl，按上述色譜條件記錄色譜圖。結(jié)果黃芩苷對(duì)照品相應(yīng)無(wú)干擾峰出現(xiàn)，說(shuō)明處方中其他成分對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)干擾。

　　8.回收率試驗(yàn)

　　采用加樣回收法。精密量取已知含量的樣品1ml，置50ml量瓶中，分別精密加入濃度為10.30mg/ml；黃芩苷對(duì)照品溶液1ml，2ml，3ml，加50%甲醇稀釋至刻度。進(jìn)樣20μl，測(cè)定峰面積，計(jì)算回收率。

　　9.樣品測(cè)定

　　精密量取各樣品1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇適量，超聲處理20min，放置至室溫，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，用45μm液膜過(guò)濾，濾液即為供試品溶液，在上述色譜條件下，進(jìn)樣20μl，記錄峰面積，計(jì)算黃芩苷含量。

儀器設(shè)備

? ? ? ? 儀器

? ? ? ? 美國(guó)SSI Ⅳ型液相泵，M525紫外檢測(cè)器，Anastar色譜工作站；賽多利斯BP-211D電子天平。

? ? ? ? 藥典流動(dòng)相樣品的HPLC色譜條件

? ? ? ? 色譜柱：Kromasil C18柱(5μm，250mm×4.6mm)；流動(dòng)相：甲醇：水：冰乙醇(60：50：1)；流速1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)274nm，柱溫40℃。

結(jié)論

　　本法測(cè)定雙黃連口服液的黃芩苷的含量，操作簡(jiǎn)單易行，以甲醇：水：冰乙酸(60：50：1)為流動(dòng)相，樣品中黃芩苷與雜質(zhì)峰完全分離，出峰時(shí)間短，峰形穩(wěn)定，進(jìn)樣量在20～220μg范圍內(nèi)呈良好線性，回收率高且穩(wěn)定，可以選定上述色譜條件的流動(dòng)相，作為該制劑黃芩苷的含量測(cè)定。