方案優(yōu)勢(shì)

準(zhǔn)確，快速，靈敏度高。

采用標(biāo)準(zhǔn)

國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)

方法/原理/步驟

　　標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制及標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

　　分別準(zhǔn)確稱取各標(biāo)準(zhǔn)品0.01g(精確至0.001g)，用甲醇分別溶解并定容至100mL，配制成100mg/L標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于一4℃冰箱中冷藏，測(cè)定時(shí)將各標(biāo)準(zhǔn)溶液混合后稀釋成0.1、0.2、0.5、1.0、5.0、10.0、15.0、20.0mg/L的溶液。分別以泰樂菌素、替米考星、氯霉素、氟苯尼考峰面積為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程及相關(guān)系數(shù)(r)。

　　樣品處理

　　將新鮮牛肉及雞肉分別勻漿后，于-18℃冰箱中保存。測(cè)定時(shí)，將勻漿冷凍保存的牛肉與雞肉樣品于室溫下自然解凍。分別準(zhǔn)確稱取20.0g樣品置于50mL具塞錐形瓶中，加入20mL乙腈，超聲10min，轉(zhuǎn)移至離心管，以5000r/min離心10min，收集上清液，離心沉淀物用上述方法重復(fù)提取2次，合并上清液。向得到的清夜中加入30mL正己烷，用力振蕩5min，靜置分層，棄去上層正己烷層。然后將溶液于40℃減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至約2mL，氮?dú)獯蹈珊蠹尤?mL甲醇一磷酸鹽混合液超聲溶解抗生素，最好定容至10mL。

　　樣品凈化

　　將HLB固相萃取小柱用5mL甲醇、5mL去離子水活化后，將4得到的樣品處理液上固相萃取柱(柱流速保持1滴/s)，用10mL蒸餾水、10mL5%甲醇水溶液淋洗固相萃取柱，再用10mL甲醇洗脫，將洗脫液用氮?dú)獯蹈珊螅尤肓鲃?dòng)相超聲定容至5mL，最后，經(jīng)0.22um濾膜過濾后進(jìn)樣。方法的準(zhǔn)確度、精密度、線性范圍、回收率

　　對(duì)于牛肉樣品分別添加0.1、0.5、1.0mg/kg 3個(gè)水平的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照上述樣品處理及凈化方法，每個(gè)水平平行測(cè)定4次，進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn)，并且以3倍信噪比分別計(jì)算泰樂菌素、替米考星、氯霉素、氟苯尼考在牛肉樣品中的檢出限，在測(cè)定條件下4種藥物在0.1—20mg/L范圍內(nèi)均呈線性，線性方程與相關(guān)系數(shù)、平均回收率、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

　　實(shí)際樣品檢測(cè)

　　本實(shí)驗(yàn)分別對(duì)10份牛肉樣品和10份雞肉樣品中泰樂菌素、替米考星、氯霉素、氟苯尼考進(jìn)行檢測(cè)，沒有發(fā)現(xiàn)牛肉樣品中含有以上抗生素，但是在4份雞肉樣品中都不同程度檢測(cè)到了泰樂菌素，最高為200ug/kg，最低為80ug/kg，平均含量為120ug/kg，高于我國動(dòng)物性食品中獸藥最高殘留限量標(biāo)準(zhǔn)(100ug/kg)

儀器設(shè)備

　　儀器與試劑

　　科捷儀器           LC-10Tvp高壓恒流泵

　                               SPD-10Tvp紫外檢測(cè)器

　　超聲波清洗儀

　　反相色譜柱C18

　　固相萃取柱

　　泰樂菌素、替米考星、氯霉素、氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)品均為天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心監(jiān)制

　　乙腈、正己烷均為優(yōu)級(jí)純

　　其它試劑均為分析純

　　實(shí)驗(yàn)用水均為二次蒸餾水

　　新鮮牛肉與雞肉均為超市所購

　　色譜條件

　　C18反相色譜柱

　　柱溫25℃，流速1mL/min，進(jìn)樣量25uL，梯度洗脫條件A相為甲醇，B相為0.2mol/L磷酸二氫鈉含10%(體積比)甲醇，調(diào)節(jié)pH為3.0，梯度洗脫程序：0-2min10%A，2-8min 10%-40%A，8-9min40%-10%A，檢測(cè)波長(zhǎng)入為275nm

結(jié)果

　　我國動(dòng)物性食品中獸藥最高殘留限量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定泰樂菌素、替米考星、氯霉素、氟苯尼考在肉品中的最高殘留量(MRL)分別為100、75、1.5、200ug/kg，本實(shí)驗(yàn)所測(cè)泰樂菌素、替米考星、氟苯尼考的檢出限分別為20、32、16ug/kg均在最高殘留限量以下，符合殘留檢測(cè)分析要求。由于氯霉素藥物特殊性，歐盟對(duì)氯霉素的檢出限要求為0.1ug/kg，美國FDA對(duì)氯霉素的檢出限要求為0.3ug/kg，按照本實(shí)驗(yàn)方法，氯霉素檢出限為19ug/kg，還未達(dá)到國際上的要求，這是因?yàn)樘崛》椒ê退脵z測(cè)器所致。今后應(yīng)該發(fā)展更加靈敏的方法以提高氯霉素。本實(shí)驗(yàn)方法的平均回收率較高(75%-87%)，而且步驟簡(jiǎn)單、操作容易、重現(xiàn)性較好相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.35%-5.41%，表明方法穩(wěn)定可靠。