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蛋白質分子穩定性測量

http://m.9999966666.com 檢測通 時間:2014-11-25

【摘要】

MicroCal VP-Capillary DSC是一種用于表征蛋白質和生物分子穩定性的高靈敏度、全自動、高通量差示掃描量熱儀。 得出的數據可為蛋白質工程、配方研究、過程開發以及最終產品配方等生物制藥開發過程提供重要指導。 無人值守運行支持24小時不間斷工作,而集成軟件簡化了工作流程和數據分析過程,幾個小時內即可交付結果,提高了生物制藥研究的效率。

方案優勢

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采用標準

測量類型:溫度中點Tm測量類型:焓?H測量類型:熱容變化?CpSample capacity:576(六個96-孔板)樣品量:370μL樣品池容積:130μL樣品展示選件:96-孔板Sample capacity:50個樣品 / 24小時(自動系統)Cell material:鉭樣品池:毛細管Noise:0.05 μCal/°CTypical sample concentration:0.1 - 2.0mg/ml溫度范圍:-10°C ~130°CMaximum scan rate:240oC/hResponse time:5s(高反饋)Multiple feedback modes:是(被動, 高增益,低增益)Automated upgrade available:是Baseline repeatability:1.5μCal/°CCell to cell heat compensation:功率反饋Self contained pressuring system:0 ~45 psi重量:25kg電源功率:100-240V, 50/60Hz, 70W尺寸 (寬, 長, 高)::1010mm x 680mm x 700mm 運行環境 Operating temperature (°C):10°C ~28°C濕度::0% ~70% 相對濕度,無冷凝

方法/原理/步驟

  馬爾文MicroCal VP-Capillary DSC系統專門用于通過差示掃描量熱法(DSC)篩選多種樣品的熱躍遷中點(Tm)和其它熱力學參數。整個過程利用自動進樣器、控制軟件和分析軟件實現自動化。

  溶液中的生物分子在其自然(折疊)構象和變性(去折疊)構象之間保持平衡。測得的熱躍遷中點(Tm)可提供快速、簡易的穩定性指示。Tm值越大,生物分子越穩定。

  測量原理

  由蛋白質和其他大分子形成的清晰結構經歷溫度誘導的構象變化,如去折疊。這些變化造成非共價鍵重新分配,從而導致熱吸收。差示掃描量熱儀測量這種熱量的吸收。

  Prod-VP-DSC_1

  MicroCal VP-Capillary DSC的熱核心包括參比池和樣品池,均封裝在一個絕緣夾套中。該裝置設計成始終保持兩池處于相同溫度。測量過程中,參比池和樣品池同時以恒定的掃描速率加熱。樣品分子去折疊時,吸收熱量,在樣品池和參比池間形成溫差(ΔT)。這就形成了整個帕帖爾單元內的熱梯度,建立起成比例的電壓,然后轉化成動力形成一個到加熱器的反饋回路,將DT(溫差)恢復至0。

  例如,由于蛋白質去折疊是一個吸熱事件,在信號中觀察是一個正位移(熱容)。該“溶解”躍遷的中點為Tm,曲線下的面積就是該過程的焓(ΔH)。

  有關數據分析和測得/導出參數的詳細描述,請參見技術頁面。

儀器設備

  DSC是一種用于表征蛋白質和其他生物分子穩定性的強大分析工具,測量溶液中熱誘導結構躍遷的焓(ΔH)和溫度(Tm)。該信息讓我們能夠深入了解使蛋白質、核酸、膠束復合體和其他大分子系統穩定或失去穩定性的影響因素。數據用來預測貨架期、制定純化策略、表征和評價蛋白質構建體或其他生物治療性實體,并用來在小分子藥物發現項目中對配體到蛋白質靶的親和力進行排名。

  高通量、高靈敏度的MicroCal VP-Capillary DSC系統的特點是:其軟件可通過簡化的實驗設置和靈活的儀器調度來簡化工作流程。自動化的數據分析和改進的數據分類功能有助于舒緩分析瓶頸,將典型實驗的數據分析時間由數日減少為幾個小時。

  獲業界認同的穩定性指示技術需要最少的分析開發過程,快速確定最佳穩定性條件。

  無標簽研究處于自然狀態的分子,實現溶液中生物分子穩定性的直接測量。

  通過恒溫控制,可儲存6個標準的96-孔板,確保了大容量和上樣方便性。

  完全一體化的自動進樣器支持每天處理多達50個樣品。

  自動裝填、進樣和池清洗功能支持一周七天、一天24小時無人值守運行。

  強大的軟件讓典型實驗的數據分析時間由數日減少為幾個小時。

  130µL的有效池容量以及僅0.2 mg/mL的典型濃度要求,允許對稀缺或珍貴的樣品進行熱力學測量。

  可用于與光學方法發生干擾的溶液,包括渾濁、有色或顆粒狀樣品。

  非反應性鉭61池具有出色的耐化學性,可確保與蛋白質和其他生物分子配合時的惰性。

  固定在原位的池僅需低程度維護,具有可再生的超靈敏度性能。

  配套的毛細管池可提供快速掃描和快速溫度平衡。

  通過智能用戶界面控制,VPViewer™利用支持MicroCal的Origin®軟件自動進行數據分析。

  全套系統包括ThermoVac樣品制備和清洗裝置,無需其它附件、試劑或耗材。

  Tm飄移配體結合篩選。

  MicroCal VP-Capillary DSC系統也可不配自動進樣器。

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