方案優勢

簡單、快速、準確。

采用標準

國家相關標準

方法/原理/步驟

　　標準溶液配制

　　精確稱取100 mg枸櫞酸西地那非標準品于100 mL容量瓶中，加入流動相50 mL使溶解，再用流動相定容至刻度，配制成1 mg/mL的儲備液。取儲備液適量，用流動相逐級稀釋，配制成濃度分別為0.5、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0µg/mL的標準溶液。

　　樣品處理

　　固體樣品：稱取樣品10 g，研磨均勻，然后精密稱取2 g研磨均勻的樣品，加入1%甲酸甲醇溶液10 mL，超聲提取30 min后用1%甲酸甲醇溶液補足體積，過濾，取5 mL濾液作為待凈化液。 液體樣品：按樣品體積比1%加入甲酸，過濾，精密取濾液5 mL作為待凈化液。

　　Strata X-C小柱依次用3 mL甲醇和3 mL水活化平衡后，將待凈化液分次過該小柱，再分別用3 mL水和3 mL甲醇清洗，抽至近干后，用5%氨水甲醇溶液洗脫3次，每次1 mL，收集洗脫液。整個過程流速小于1 mL/min。洗脫液用氮氣吹干，1 mL流動相溶解，0.45µm濾膜濾過，續濾液作為供試品溶液。

　　固相萃取條件的選擇

　　保健品中成分復雜，簡單的液-液萃取并不能除去大部分雜質，會嚴重干擾西地那非的液相測定。Strata-X-C是混合型陽離子交換固相萃取小柱，對堿性化合物有很強的專屬選擇性，成功用于復雜樣品中三聚氰胺等堿性化合物的純化和濃縮。

　　西地那非為堿性化合物，本法利用其堿性性質，采用Strata-X-C對樣品進行純化和濃縮，分別使用水和甲醇清洗，除去大部分水溶性和脂溶性雜質，再用5%氨水甲醇溶液洗脫堿性的西地那非。

　　本固相萃取方法凈化效果好，回收率穩定，平均為95.8%(20µg/mL，RSD=3.9%，n=6)。

　　色譜條件的選擇

　　本法試驗了不同比例的乙腈與0.1%甲酸水溶液以及乙腈與不同濃度醋酸銨水溶液作流動相的效果，發現乙腈與10 mM醋酸銨水溶液作流動相時，峰形對稱、尖銳，檢測靈敏度高。本法還采用實驗室常用的紫外檢測器檢測，適用于一般實驗室的常規檢測分析。

　　本法使用了50 mm長的Kinetex C18色譜柱。Kinetex C18色譜柱是一種新型核-殼技術填料色譜柱,由于大大改善了填料的傳質阻抗影響，可以在常規液相色譜儀器上實現超高壓液相的性能，從而達到快速、高效的效果，大大提高工作效率，且不受儀器條件的影響，方便在各個實驗室進行方法轉移。在流速1.8 mL/min下，西地那非在約2.5 min處出峰，沒干擾。

儀器設備

　　主要儀器

　　高效液相色譜儀(南京科捷)；超聲波清洗器；氮吹儀；離心機。

　　試劑

　　枸櫞酸西地那非標準品；固相萃取小柱Strata X-C 60 mg/3 mL；乙腈；甲酸、氨水、醋酸銨；文中所用水均為超純水。

　　色譜條件

　　色譜柱：C18 2.6µm 50 mm x 4.6 mm；

　　流動相：乙腈-10 mM醋酸銨(V/V=35/65)；

　　流速：1.8 mL/min；

　　柱溫：室溫；

　　檢測波長：290 nm；

　　進樣量：10µL

結論

　　本法采用陽離子交換固相萃取小柱對樣品進行凈化后，進行高效液相色譜分析。固相萃取可除去樣品中的大量雜質，再使用高效的液相色譜柱使枸櫞酸西地那非能夠快速出峰(僅約2.5 min)而不會受雜質峰干擾。

　　該方法操作簡單，省時快速，精密度和準確度高，可用于片劑、膠囊劑、丸劑等固體保健品和口服液、酒類等液體保健品中枸櫞酸西地那非的檢測。