方案優(yōu)勢(shì)

鹽酸克倫特羅做HPLC 分析時(shí)不需要衍生， 利用β-腎上腺素能激動(dòng)劑分子可與C18 或C8 固定相分子相互作用，應(yīng)用反相柱檢測(cè)β-激動(dòng)劑類物質(zhì)，具有檢測(cè)精密度高，專屬性強(qiáng)，假陽(yáng)性低的優(yōu)點(diǎn)。

采用標(biāo)準(zhǔn)

NY438-2001《飼料中鹽酸克倫特羅的測(cè)定》

方法/原理/步驟

色譜條件 色譜柱：Hitachi LaChrom C18(5μm) 4.6mmI.D.x150mmL 柱 溫：30℃ 流速：1.0 mL/min 檢測(cè)波長(zhǎng)：243nm 進(jìn)樣量：15μL 流動(dòng)相： 0.05%磷酸水溶液：乙腈=89：11 ? 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備 準(zhǔn)確稱取一定量鹽酸克倫特羅標(biāo)樣于10ml容量瓶，用甲醇超聲溶解并定容，作為貯備液；稀釋成濃度為2μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，用0.45μm濾膜過(guò)濾，進(jìn)樣測(cè)定。 ? 樣品溶液制備 1、 稱取約5g飼料樣品于100mL三角瓶中，準(zhǔn)確加入100ml提取液（0.5%偏磷酸溶液：甲醇=80:20）， 超聲提取15min后振搖15s，靜置，取上清液于離心管中，4000轉(zhuǎn)/分鐘離心10min；用0.45μm濾膜過(guò)濾，進(jìn)樣測(cè)定。 2、 凈化：移取離心過(guò)上清液10ml，置150ml分液漏斗中滴加2M氫氧化鈉溶液，充分振搖，調(diào)pH=11~12，分別加30、25ml乙醚萃取兩次，醚層通過(guò)無(wú)水硫酸鈉干燥，并用乙醚定容至50ml。準(zhǔn)確移取25ml于50ml燒杯中，置通風(fēng)櫥內(nèi)，50℃水浴蒸干，殘?jiān)?ml 0.02M鹽酸溶解后，置SPE小柱上，分別用1ml含2%氨水的5%甲醇水溶液和含2%氨水的30%甲醇水溶液淋洗，最后用甲醇洗脫，洗脫液45℃氮?dú)獯蹈桑瑲堅(jiān)性偌尤?ml 0.02M鹽酸超聲溶解，用0.45μm濾膜過(guò)濾，進(jìn)樣測(cè)定。

儀器設(shè)備

　　儀器

　　1)四元梯度泵PM1110

　　2)自動(dòng)進(jìn)樣器PM1210

　　3)柱溫箱PM1310

　　4)紫外檢測(cè)器PM1410

　　5) PM色譜工作站。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

　　1、標(biāo)樣測(cè)定

　　根據(jù)NY438-2001的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，得到的鹽酸克倫特羅的峰形很好，因此選擇該比例進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，出峰時(shí)間為12.62min，圖1為鹽酸克倫特羅標(biāo)樣的色譜圖。

　　圖1鹽酸克倫特羅標(biāo)樣色譜圖

　　2、重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

　　對(duì)鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，6針?lè)迕娣e的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.07%，重現(xiàn)性很好，結(jié)果見(jiàn)下表

　　表1鹽酸克倫特羅標(biāo)樣6針?lè)迕娣e的重現(xiàn)性

　　3、飼料樣品檢測(cè)

　　某豬飼料樣品經(jīng)前處理后測(cè)定，在12.62min未檢測(cè)到鹽酸克倫特羅殘留，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖2。

　　圖2飼料樣品與加標(biāo)樣品重疊色譜圖

結(jié)論

　　采用日立Primaide高效液相色譜儀四元梯度配紫外檢測(cè)器，準(zhǔn)確測(cè)定了違禁藥物鹽酸克倫特羅的含量。在上述色譜條件下，可以使被測(cè)樣品中各峰很好的分離，重現(xiàn)性良好。對(duì)飼料樣品中該項(xiàng)目進(jìn)行了檢測(cè)，未檢測(cè)到鹽酸克倫特羅殘留，方法簡(jiǎn)便實(shí)用，專屬性好，適用于常規(guī)限量檢測(cè)。