方案優勢

靈敏、準確和實用

采用標準

相關標準

方法/原理/步驟

　　目前，常用的黃曲霉毒素檢測方法主要有薄層色譜法(TLC)、酶聯免疫吸附法(ELISA)和碘化熒光光度法(SFB)。由于上述方法都有操作繁瑣、實驗過程長、精確度低以及直接接觸毒素等缺點，并且由于非常重要的黃曲霉毒素B1和G1的低熒光性，只有黃曲霉毒素B2和G2有其自己的熒光，那么，黃曲霉毒素B1和G1就不得不通過衍生來檢測。通過光化學反應(如下圖)，黃曲霉毒素B1和G1被羥基化(水解)從而得到穩定的可測熒光。

　　如果通過加入碘的甲醇衍生劑，通過質譜測得，碘和甲氧基分別加成到了黃曲霉毒素B1和G1雙鍵兩側，反應形式類似于上述光化學反應，那些其他重要的用于檢測的黃曲霉毒素B2和G2的化學性質在光化學反應中并不改變，并且B2a和G2a有著區別于B2和G2的熒光強度。

　　所以食品及飼料越來越多地采用高效液相色譜柱后衍生法來檢測黃曲霉毒素，一個樣品只需5 min，就能達到定量準確、快速檢測的要求。柱后衍生熒光檢測具有選擇性強、靈敏度高、重現性好等優點。

　　檢測過程

　　提?。簶悠啡磕ニ?，通過40目篩，混勻，稱取試樣25.0g(精確到0.1g)于500mL燒杯中，加入5g氯化鈉及125mL甲醇水溶液(體積比3：2)，用均質器高速攪拌3min，過濾。移取20mL濾液到50mL量筒中，并加入20mL水稀釋，攪勻，以玻璃纖維濾紙過濾1-2次，至濾液澄清，隨即進行免疫親和柱(高度富集和純化)凈化操作。

　　凈化：將免疫親和柱連接于10mL玻璃針筒下，準確移取8mL上述澄清液，注人玻璃針筒內，以1-2滴/s的流速全部通過免疫親和柱。再用10mL水以同樣的流速淋洗柱子兩次，棄去全部流出液。再用1.0mL甲醇淋洗親和柱，洗脫流速為1-2滴/s，將所有樣品淋洗液(1mL)及1.0mL水收集于2mL玻璃測試瓶中，待測。

　　色譜條件

　　色譜柱：SMT C18，250mm×4.6mm×5μm

　　色譜柱溫度：室溫

　　流動相：甲醇-乙腈-水溶液(22＋22+56)；

　　流速：1.0mL/min；

　　柱后衍生試劑：0.03%的碘溶液

　　流速：0.3 mL/min

　　衍生化溫度：70℃

　　熒光檢測器：激發波長360 nm，發射波長450 nm；

　　進樣量：20μL

　　黃曲霉毒素樣品進樣液相色譜檢測，所得圖譜如下圖

　　回收率：≥90%

　　精密度(RSD)：1%~2%

　　線性范圍：0.1-50μg/kg

　　相關系數：≥0.9950

　　最低檢出限：0.1mg/kg

　　低于國家限量規定

儀器設備

蘭博series 4060高效液相色譜