方案優(yōu)勢(shì)

采用SPE-HPLC-UV 測(cè)定飼料中磺胺嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺喹惡啉5種磺胺類(lèi)藥物的方法，簡(jiǎn)單快速，準(zhǔn)確。

采用標(biāo)準(zhǔn)

國(guó)家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)

方法/原理/步驟

　　1.樣品制備

　　飼料，打碎。

　　2.樣品提取

　　稱(chēng)取混合飼料樣品2 g，置于具塞錐形瓶中，加入50 mL的乙腈于振蕩器振蕩提取30 min，過(guò)濾，濾液備用。

　　3.樣品SPE凈化

　　準(zhǔn)確吸取試液混合飼料2 mL，移入用10 mL乙腈淋洗過(guò)的堿性氧化鋁小柱中，令其自然流速流出。待試液全部流出后吹干，用2次2 mL流動(dòng)相洗脫，收集洗脫液，并過(guò)0.45μm的濾膜，濾液上HPLC測(cè)定。

儀器設(shè)備

　　儀器與試劑

　　儀器：四元低壓LabTech-HPLC；色譜柱：LabTechC18 4.6 mm×25 cm；LabTech旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；Win-12手動(dòng)固相萃取儀。

　　試劑：冰乙酸，優(yōu)先級(jí)；甲醇，色譜純；乙腈，色譜純；所用水均為超純水。

　　流動(dòng)相：在1 000 mL容量瓶中加入750 mL去離子水，移取冰乙酸3 mL加入水中，與250 mL乙腈混合，搖勻，過(guò)0.45μm濾膜，脫氣，備用。

　　磺胺類(lèi)藥物標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度20μ/mL：磺胺嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺喹惡啉。

　　固相萃取柱：堿性氧化鋁固相萃取柱，500 mg/3 mL。

　　HPLC色譜條件

　　流動(dòng)相：乙腈:水(25:75)；流速：1.0 mL/min；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為270 nm；進(jìn)樣量：20μL；柱溫：40℃。

結(jié)果與結(jié)論

　　磺胺類(lèi)藥物的HPLC色譜圖

　　將5種磺胺類(lèi)藥物混標(biāo)進(jìn)HPLC分析，磺胺嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺喹惡啉濃度均是4mg/mL。結(jié)果如圖所示：見(jiàn)圖1。

圖1 5種磺胺類(lèi)藥物的HPLC色譜圖

　　重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

　　將5種磺胺類(lèi)藥物混標(biāo)進(jìn)HPLC分析，磺胺嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺喹惡啉濃度均是2mg/mL，重復(fù)進(jìn)樣，重疊色譜圖如下圖所示，并且計(jì)算出峰時(shí)間重復(fù)性RSD均小于5%，見(jiàn)表1。

　　1.磺胺嘧啶；2.磺胺間甲氧嘧啶；3.磺胺二甲基嘧啶；4磺胺甲惡唑；5.磺胺喹惡啉

　　圖2 5種標(biāo)品的重疊色譜圖

　　表1 5種標(biāo)品的重復(fù)性及RSD%

　　磺胺嘧啶　            4.558    4.557     4.540　4.553　4.553　0.158

　　磺胺間甲氧嘧啶　6.377　6.373　6.360　 6.377　6.377　0.116

　　磺胺二甲基嘧啶　7.597　7.590　7.573　 7.587　7.582　0.118

　　磺胺甲惡唑           10.453　10.440　10.408　10.433　10.420　0.167

　　磺胺喹惡啉　       16.950　16.935　16.895　16.917　16.893　0.147

　　飼料樣品的空白色譜圖和加標(biāo)色譜圖

　　飼料空白樣品和加標(biāo)樣品經(jīng)過(guò)提取，并通過(guò)小柱凈化后，得到的色譜圖見(jiàn)圖3和圖4.。

　　圖3飼料樣品空白的色譜圖

　　1.磺胺嘧啶；2.磺胺間甲氧嘧啶；3.磺胺二甲基嘧啶；4磺胺甲惡唑；5.磺胺喹惡啉

　　圖4飼料樣品加標(biāo)的色譜圖(1 mg/kg)

　　飼料樣品過(guò)SPE凈化的回收率及RSD

　　采用加標(biāo)樣品(加標(biāo)濃度磺胺嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶;磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺喹惡啉均為1 mg/mL)，經(jīng)提取、SPE凈化處理，并用HPLC分析，計(jì)算加標(biāo)回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，5種磺胺類(lèi)藥物的回收率均在82.65%~105.70%之間，RSD均小于10%(表2)。表2

        飼料樣品中加標(biāo)過(guò)SPE5種磺胺類(lèi)藥物的回收率及RSD(n = 5)

　　峰序　             保留時(shí)間(min)   SPE-1　  SPE-2　   SPE-3　  SPE-4　  SPE-5　 平均值　 RSD%

　　磺胺嘧啶　            4.558　       102.04　   94.62　   91.92　  85.79　   94.77　   93.83　   6.24

　　磺胺間甲氧嘧啶　6.377　        108.14　   99.90　 98.39　   91.99　  100.78　   99.84　    5.79

　　磺胺二甲基嘧啶　7.597　       108.46　   102.18　106.25　107.78　103.85　105.70　     2.51

　　磺胺甲惡唑　         10.453   　94.46　    83.06　   86.91　    76.719　   78.97　84.02     　8.35

　　磺胺喹惡啉　         16.950　    93.22   　85.57　   80.65　     76.54   　77.28　  82.65　    8.35

　　結(jié)論

　　本方法對(duì)飼料樣品提取，并采用手動(dòng)的Win-12SPE凈化，采用HPLC檢測(cè)其中的5種磺胺類(lèi)藥物，5種磺胺類(lèi)藥物的回收率均在82.65%~105.70%之間，RSD均小于10%。實(shí)驗(yàn)過(guò)程操作簡(jiǎn)單，結(jié)果顯示數(shù)據(jù)理想，可用于常規(guī)的飼料中磺胺類(lèi)藥物的檢測(cè)。