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篤瑪 雞絨毛膜促性腺激素(CG) ELISA 試劑盒 介紹
- 雞絨毛膜促性腺激素(CG) ELISA 試劑盒
酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟
將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。
編 號:將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號,每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
加樣反應(yīng):加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50μl/孔到各自的微孔中,然后加酶標(biāo)記物50μl/孔,再加入50μl/孔的抗體工作液,用蓋板膜封板,輕輕振蕩5秒混勻,25℃反應(yīng)30分鐘。
洗 滌:小心揭開蓋板膜,將孔內(nèi)液體甩干,用工作洗滌液250μl/孔充分洗滌5次,每次間隔30秒,用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
顯 色:每孔加入底物液A 50μl,再加底物液B 50μl,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光顯色15分鐘(若藍(lán)色過淺,可適當(dāng)延長反應(yīng)時(shí)間)。
終 止:每孔加入終止液50μl,輕輕振蕩混勻,終止反應(yīng)。
測吸光值:用酶標(biāo)儀于450nm處測定每孔吸光度值(建議用雙波長450/630nm)。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。
雞絨毛膜促性腺激素(CG) ELISA 試劑盒
樣品準(zhǔn)備
1. 手術(shù)取出動(dòng)物組織,并秤重以確定200毫克組織重量
2. (選擇步驟)放進(jìn)預(yù)冷的15毫升錐形離心管
3. (選擇步驟)加入xx毫升 清理液(Reagent A)清洗1次
4. 即刻用刀片切碎組織
5. 放進(jìn)一個(gè)預(yù)冷的15毫升錐形離心管
6. 加入預(yù)冷的xx毫升 清理液(Reagent A)
7. 渦旋震蕩5秒,充分混勻
8. 即刻放入預(yù)冷的DOUNCE勻漿器,在冰槽里用勻漿棒勻化組織(約40至80下)
9. 將所有組織勻漿物移入1.5毫升離心管
10. 放進(jìn)4℃臺式離心機(jī)離心10分鐘,速度為10000g
11. 移取500微升到新的1.5毫升離心管
12. 加入xx微升 穩(wěn)定液(Reagent B),混勻
13. 放在冰槽里待測(注意:須1周內(nèi)使用)
雞絨毛膜促性腺激素(CG) ELISA 試劑盒
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
500ng/L 5號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
250ng/L 4號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
125ng/L 3號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
62.5ng/L 2號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
31.25ng/L 1號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍(48T的20倍)濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
上海篤瑪生物科技有限公司
楊燕燕
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