檢測認證人脈交流通訊錄
- 羊抗人Tf血清
操作步驟
試管法(改良 Mayer 法)
1、致敏羊紅細胞: 2%綿羊紅細胞加等量稀釋后的溶血素( 1:2000),混勻,置 37℃水浴 30min。
2、稀釋血清:待測血清 0.2ml,加應用液 3.8ml,稀釋度為 1:20。
3、配制溶血標準管:全溶血管:2%綿羊紅細胞 2ml 加 8ml 蒸餾水,混勻。
50%溶血管:取全溶血管液 2ml 加緩沖液 2ml。
4、按表所示,依次加各成分于試管中,混勻,置 37℃水浴 30min, 第 10 管為非溶血對照:補體 CH50 測定試管法
5、結果測定:取出試管, 2000r/min 離心 10min,對照管應不溶血。肉眼比色,選與 50%溶血標準管相近二管,再用分光光度計測(波長 542nm、 0.5cm 比色杯) OD 值,
確定與標準管最接近者為終點管,然后按下公式計算 CH50 值:
血清補體 CH50( U/ml) =( 1/血清用量)×稀釋度。
如第 5 管為終點管,測待測血清中CH50為66.7U/ml。血清補體CH50正常值為50-100U/ml。
羊抗人Tf血清
標本的采集及保存
1.血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
3.細胞培養物上清或其它生物標本:1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
注:標本溶血會影響最后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
標本的稀釋原則:
首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量,確定適當的稀釋倍數。只有稀釋至標準曲線的范圍內,檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中,應做好詳細的記錄。最后計算濃度時,稀釋了“N”倍,標本的濃度應再乘以“N”。
標準品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為300 pg/ml,做系列倍比稀釋后,分別稀釋300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml,臨用前15分鐘內配制。
如配制150 pg/ml標準品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
生物素標記抗體的稀釋原則:
臨用前以生物素標記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標記抗體加990μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制。
辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則:
臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制。
羊抗人Tf血清
免責聲明
1. 試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所產生的一切后果,由實驗者承擔,本公司概不負責。
2. 嚴格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔。
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