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活細(xì)菌/死細(xì)菌雙染試劑盒

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　　活細(xì)菌/死細(xì)菌雙染試劑盒　　SYTO 9活細(xì)菌/死細(xì)菌雙染試劑盒的工作原理在于：SYTO 9和PI的光譜特征以及穿透健康細(xì)菌細(xì)胞的能力不同。單獨(dú)使用時(shí)，SYTO 9能對(duì)群體內(nèi)的所有細(xì)菌進(jìn)行標(biāo)記—具有完整膜和受損膜的細(xì)菌；相反，PI只能滲透進(jìn)入受損的膜，PI的插入會(huì)引起SYTO 9染色熒光的降低，當(dāng)體系內(nèi)加入兩種染料時(shí)。因此，通過適量比例的SYTO 9和PI的混合染色，具有完整膜結(jié)構(gòu)的細(xì)菌呈綠色熒光，而具受損膜結(jié)構(gòu)的細(xì)菌呈紅色熒光。兩者染料的最大激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別是480/500nm（SYTO 9）和 490/635nm（PI）。背景基本無熒光。本試劑盒兼容于熒光顯微鏡，熒光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀、流式細(xì)胞儀或其它熒光檢測(cè)儀器。　　染色條件的優(yōu)化：　　試劑盒內(nèi)的兩種染料都經(jīng)過平衡優(yōu)化，按照1：1的比例進(jìn)行混合用于絕大多數(shù)的樣本都能得到良好的區(qū)分活/死細(xì)菌。偶然情況下，兩種染料的混合比例需根據(jù)實(shí)際需求進(jìn)行優(yōu)化調(diào)整。比如：在待檢樣本中，綠色熒光太突出，建議要么降低SYTO 9濃度，要么提高PI濃度。　　為了全面優(yōu)化染色條件，建議測(cè)試梯度濃度的SYTO 9，每一種濃度與梯度濃度的PI進(jìn)行組合染色。建議按照1ml細(xì)菌懸液加入3?l不同混合比率的染料預(yù)混液。　　[注]：SYTO 9 +PI 對(duì)細(xì)菌的染色請(qǐng)按照說明書建議的15min來操作，不要超過30min。 SYTO 9有很好的細(xì)菌滲透性，我們給的實(shí)驗(yàn)條件都是優(yōu)化過。 SYTO 9只有在哺乳動(dòng)物細(xì)胞染色，可能會(huì)延長(zhǎng)染色時(shí)間到120min。　　由于染的是活菌+死菌的比例，請(qǐng)染色后盡快觀察，不要超過1h。另，染色后基本是不用清洗的，除非覺得背景熒光很高，就是非細(xì)菌的菌體部分都能看到熒光，才有必要簡(jiǎn)單清洗一次。　　三、熒光顯微鏡操作步驟：　　活菌和死菌的熒光可能用標(biāo)準(zhǔn)的熒光素長(zhǎng)通濾片設(shè)置來同時(shí)觀察。替代方案的話，活菌（綠色熒光）和死菌（紅色熒光）可分別用熒光素和Texas Red帶通濾光片設(shè)置。用于本試劑盒檢測(cè)的建議熒光顯微鏡濾片設(shè)置。　　http://www.shujibio.com/Products-38641004.html 　　https://www.chem17.com/st326659/erlist_2527117.html

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