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ELISA試劑盒實驗原理與操作步驟

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    • 　　ELISA試劑盒實驗原理： 　　本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人26S蛋白酶體（26S PSM）水平。用純化的人26S蛋白酶體（26S PSM）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入26S蛋白酶體（26S PSM），再與HRP標記的26S蛋白酶體（26S PSM）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的26S蛋白酶體（26S PSM）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人26S蛋白酶體（26S PSM）活性濃度。 　　操作步驟： 　　1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。 　　2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。 　　3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 　　4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。 　　5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。 　　6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。 　　7.溫育：操作同3。 　　8.洗滌：操作同5。 　　9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘。 　　10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。 　　11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。 　　https://www.chem17.com/st523160/product_36937929.html 　　http://www.ylkbio.com/Products-36937929.html

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