麻醉后的大鼠固定于腦立體定位儀，具體操作為大鼠上門齒卡入橫桿，調(diào)節(jié)旋鈕壓緊鼻桿；將耳桿插入大鼠耳道，平衡調(diào)節(jié)左、右耳桿，使大鼠兩耳間連線與耳桿在同一直線上，保證左、右耳桿的刻度位置相同后調(diào)節(jié)旋鈕鎖緊耳桿。大鼠固定完好的判斷標準：鼻對正中，頭部不動，提尾不掉，目測大腦放置水平（使顱骨水平）。
眼科剪縱向剪開大鼠頭部皮膚約3cm，用鑷子沿顱骨表面剝離骨膜結(jié)締組織并剪除，用無菌棉球蘸去浸出的血液，將顱骨表面清理干凈，露前后囟。
調(diào)節(jié)腦定位儀上橫縱坐標旋鈕使牙科微孔鉆位于前囟點上方并輕觸該點，以Bregma點作為三維坐標系的參考點（零點）。
根據(jù)注射位置的不同，及大鼠重量的不同，注射坐標不同。此處以普通SD大鼠（350±50g）側(cè)腦室注射為例，通過查詢腦立體定位圖譜確定需要定位的核團位置，確定坐標值，即ML值（X軸）、AP值（Y軸）、DV值（Z軸）。側(cè)腦室位置為前囟點旁開1.5mm，向后囟方向1.1mm，深4.5mm（坐標即為±1.5，-1.1，-4.5）。調(diào)節(jié)X軸（1.5個單位）及Y軸（1.1個單位）旋鈕移動操作臂到坐標位置，使用微孔牙科鉆緩慢打孔。鉆孔另一種操作法為確定鉆孔位置后在該點蘸墨打點標記，后手持牙科鉆進行鉆孔。顱骨鉆穿時有明顯落空感，此時應(yīng)小心操作避免傷及硬腦膜。
固定微量注射器，調(diào)節(jié)Z軸旋鈕（4.5個單位）使微量注射器針頭插入側(cè)腦室。進行緩慢注射，注射速度2ml/min，注射劑量視具體實驗而定，一般在5ml左右。
注射完成后留針靜置10min以便藥液充分吸收。緩慢調(diào)節(jié)Z軸旋鈕向上拔出針頭，鉆孔處涂抹骨蠟。
縫合皮膚，完成腦定位注射。
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