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上海一研感覺態(tài)細(xì)胞

上海一研感覺態(tài)細(xì)胞培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備： 1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。 2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。操作方法： 1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手撥EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。 2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。 3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。 4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。 5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。感覺態(tài)細(xì)胞 http://www.e-research.cn/Products-32952923.html https://www.chem17.com/st307295/product_32952923.html

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